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藥品微生物實驗室規范指導原則用于指導藥品微生物檢驗實驗室的質量控制。藥品微生物的檢驗結果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗中，為保證檢驗結果的可靠性，必須使用經驗證的檢測方法并嚴格按照藥品微生物實驗室規范要求進行試驗。
藥品微生物實驗室規范包括以下幾個方面：人員、培養基、菌種、實驗室的布局和運行、設備、文件、實驗記錄、結果的判斷等。 人員 從事藥品微生物試驗工作的人員應具備微生物學或相近專業知識的教育背景。 實驗人員應依據所在崗位和職責接受相應的培訓，在確認他們可以承擔某一任工作所必需的設備操作、微生物檢驗技術和實驗室生物安全等方面的培訓，經考核合格后方可上崗，同時，實驗室應制定所有級別實驗人員的繼續教育計劃。 檢驗人員必須熟悉相關檢測方法、程序、檢測目的和結果評價。微生物實驗室的管理者其專業技能和經驗水平應與他們的職責范圍相符。如：管理技能、實驗室安全、試驗安排、預算、實驗研究、實驗結果的評估和數據偏差的調查、技術報告書寫等。 實驗室應通過參加內部質量控制、能力驗證或使用標準菌株等方法客觀評估檢驗人員的能力，必要時對其進行再培訓并重新評估。當使用一種非經常使用的方法或技術時，有必要在檢測前確認微生物檢測人員的操作技能。 所有人員的培訓、考核內容和結果均應記錄歸檔。 培養基
培養基是微生物試驗的基礎，直接影響微生物試驗結果。適宜的培養基制備方法、貯藏條件和質量控制試驗是提供優質培養基的保證。 1．培養基的制備 培養基可按處方配制，也可使用按處方生產的符合規定的脫水培養基。在制備培養基時，應選擇質量符合要求的脫水培養基或單獨配方組分進行配制。脫水培養基應附有處方和使用說明，配制時應按使用說明上的要求操作以確保培養基的質量符合要求，不得使用結塊或顏色發生改變的脫水培養基。 脫水培養基或單獨配方組分應在適當的條件下儲存，如低溫、干燥和避光，所有的容器應密封，尤其是盛放脫水培養基的容器。商品化的成品培養基除了應附有處方和使用說明外，還應注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗的質控菌和用途。 為保證培養基質量的穩定可靠，各脫水培養基或各配方組分應準確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。 配制培養基所用容器和配套器具應潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質的殘留。對熱敏感的培養基如糖發酵培養基其分裝容器一般應預先進行滅菌，以保證培養基的無菌性。 脫水型培養基應完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應注意不要過度加熱，以避免培養基顏色變深。如需要添加其它組分時，加入后應充分混勻。 應按照生產商提供或使用者驗證的參數進行培養基的滅菌。商品化的成品培養基必須附有所用滅菌方法的資料。培養基滅菌一般采用濕熱滅菌技術，特殊培養基可采用薄膜過濾除菌。 培養基若采用不適當的加熱和滅菌條件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此，培養基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養基滅菌方法和條件，應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環系統也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數的細菌和真菌培養基促生長的質量。滅菌器中培養基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應根據滅菌培養基的特性，進行全面的滅菌程序驗證。 應確定每批培養基滅菌后的pH（冷卻至室溫25℃測定）。若培養基處方中未列出PH 的范圍，除非經驗證表明培養基的pH 允許的變化范圍很寬，否則，PH的范圍不能超過規定的±0.2。 制成平板或分裝于試管的培養基應進行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應相同，盡量避免形成汽泡，固體培養基表面不得產生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結晶，不得污染微生物等。應檢查和記錄批數量、有效期及培養基的無菌檢查。 2.培養基的貯藏 自配的培養基應標記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養基標簽上應標有名稱、批號、生產日期、失效期及培養基的有關特性，生產商和使用者應根據培養基使用說明書上的要求進行保存，所采用的保藏和運輸條件應使成品培養基最低限度的失去水分并提供機械保護。 培養基滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中，質量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養基不得在0℃或0℃以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。 培養基應避光保存，若要長期保存，應置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現配現用，如置冰箱保存，一般不超過一周，且應密閉包裝，若延長保存，保存期需經驗證確定。 固體培養基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過度受熱造成培養基質量下降或微生物污染。培養基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐，應避免培養基過度受熱及水分的蒸發，更要注意安全。融化的培養基應置于45～50℃的水浴中，不得超過8 小時。傾注培養基時，應擦干培養基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進入培養基中造成污染。 使用過的培養基（包括失效的培養基）應按照國家污染廢物處理相關規定進行。 3.質量控制試驗 實驗室應對試驗用培養基建立質量控制程序，以確保所用培養基質量符合相關檢測的需要。 實驗室配制或商品化的成品培養基的質量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養基將影響微生物的生長或復蘇，從而影響試驗結果的可靠性。 所有配制好的培養基均應進行質量控制試驗。實驗室配制的培養基的常規監控項目是pH，適用性檢查試驗，定期的穩定性檢查以確定有效期。培養基在有效期內應依據適用性檢查試驗確定培養基質量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養基其組成成分的穩定性。 除藥典附錄另有規定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養基且過程受控，那么同一批脫水培養基的適用性檢查試驗可只進行一次。如果培養基的制備過程未經驗證，那么每一批培養基均要進行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據培養基的用途從相關附錄中進行選擇，也可增加從生產環境及產品中常見的污染菌株。 培養基的質量控制試驗若不符合規定，應尋找不合格的原因，以防止問題重復出現。任何不符合要求的培養基均不能使用。 用于環境監控的培養基須特別防護。用于關鍵區域監控的培養基最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養基，那么在使用前應進行100%的預培養以防止外來的污染物帶到環境中及避免出現假陽性結果。 菌 種 試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統一操作程序制備的菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證。 藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內或國外菌種收藏機構的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的商業派生菌株。 標準菌株的復活或培養物的制備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。從國內或國外菌種收藏機構獲得的標準菌株經過復活并在適宜的培養基中生長后，即為標準儲備菌株。標準儲備菌株應進行純度和特性確認。標準儲備菌株保存時，可將培養物等份懸浮于抗冷凍的培養基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥，液氮儲存，超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。 工作菌株的傳代次數應嚴格控制，不得超過5 代（從菌種收藏機構獲得的標準菌株為第0 代），以防止過度的傳代增加表型變化的風險。1 代是指將活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基中培養，任何亞培養的形式均被認為是轉種或傳代一次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。 工作菌株不可代替標準菌株，標準菌株的商業衍生物僅可用作工作菌株。 實驗室必須建立和保存其所有菌種的進出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷毀的記錄，應有文件化的程序管理菌種（從標準菌株到工作菌株），該程序包括：標準菌種的申購記錄；從標準菌株到工作菌株操作及記錄；菌種必須定期轉種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關鍵診斷指標的確認，并記錄；每支菌種都應適當標注，注明其名稱、標準號、接種日期、所傳代數；菌種生長的培養基和培養條件；菌種保存的位置和條件；其它需要的程序。 實驗室的布局和運行 實驗室應具有進行微生物檢測所需的適宜、充分的設施條件。實驗室的布局與設計應充分考慮到良好微生物實驗室操作規范和實驗室安全的要求。實驗室布局設計的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對環境和人員造成危害。合適的規劃及活動區域的合理區分將提高微生物實驗室操作的可靠性。 通常，實驗室應劃分成潔凈或無菌區域和活菌操作區域，同時應根據試驗目的，在時間或空間上有效分隔不相容的試驗活動，將交叉污染的風險降低到最低。 一般情況下，藥品微生物檢驗的實驗室應有符合無菌檢查法（附錄ⅩⅢB）和微生物限度檢查法（附錄ⅩⅢC）要求的、用于具有開展無菌檢查、微生物限度檢查、無菌采樣等檢測活動的、獨立設置的潔凈室（區）或隔離系統，并為上述檢驗配備相應的細菌（真菌）等實驗室、培養室、培養基及實驗用具準備（包括滅菌）區、樣品接收和儲藏區、標準菌株儲藏區、污染物處理區和文檔處理區等輔助區域，同時，應對上述區域明確標識。 實驗室應對進出潔凈區域的人和物建立控制程序和標準操作規程（如更衣程序等），應按相關國家標準建立潔凈室（區）和隔離系統的驗證、使用和清潔維護標準操作規程，對可能影響檢測結果的工作（如潔凈度驗證及監測、消毒、清潔維護等）能夠有效地控制、監測并記錄。 實驗室對所用的消毒劑種類應定期更換，使用的消毒劑應無菌。一些樣品需要證明微生物的生長，并需要在實驗室進一步分析污染物的特性，如再培養、染色、微生物鑒定或其它確定試驗均應在實驗室的活菌操作區進行。任何出現微生物生長的培養物不得在實驗室無菌區域內打開。對染菌樣品的有效隔離可以減少假陽性結果的出現。 實驗人員不能在實驗室的活菌操作區域或鄰近區域進行抽樣。應采用無菌操作技術進行取樣，防止在取樣過程中使樣品受到微生物的污染而導致假陽性的結果。因此，實驗設施應設計成保證樣品在控制條件下抽樣，包括能有效防止微生物污染的無菌設施及環境、適宜的無菌服、無菌抽樣器具和合格的操作人員，并記錄抽樣環境的監測結果。如果可能，所有的樣品應在具有無菌條件的特定抽樣間進行無菌抽樣。 被檢樣品應有傳遞、儲存、處置和識別管理程序。待驗樣品應在合適的條件下儲存并能夠保證其完整性而不改變其性狀，應明確規定和記錄儲存條件。 實驗室還應針對類似于帶菌培養物溢出的意外事件制定處理規程。如：活的培養物灑出必須就地處理，不得使培養物污染擴散。 實驗室應有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設施和制度。 設 備 實驗室應配備與檢驗能力和工作量相適應的儀器設備，其類型、測量范圍和準確度等級應滿足檢驗所采用標準的要求，設備的安裝和布局應便于操作，易于維護、清潔和校準。 實驗室在儀器設備完成相應的檢定、校準、驗證、確認其性能，并形成相應的操作、維護和保養的標準操作規程后方可正式使用，使用要有記錄。為保證設備處于良好工作狀態，應定期維護和期間核查，并保存相關記錄。 微生物實驗室所用的儀器應根據日常使用的情況進行定期的校準，并記錄。校準的周期和校驗的內容將根據儀器的類型和設備在實驗室產生的數據的重要性的不同而不同。重要的儀器設備，如培養箱、冰箱等，應由專人負責，保證其運行狀態正常和受控，同時應有相應的備用設備以保證試驗菌株和微生物培養的連續性；對于培養箱、冰箱、高壓滅菌鍋等影響實驗準確性的關鍵設備應在其運行過程中對關鍵參數（如溫度、壓力）進行連續觀測和記錄，有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置。如果發生偏差，應評估對以前的檢測結果造成的影響并采取必要的糾正措施。 對于一些容易污染微生物的儀器設備如水浴鍋、培養箱、冰箱和生物安全柜等應定期進行清潔和消毒。 對試驗需用的無菌器具應實施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應的標準操作規程，無菌器具應有明確標識并與非無菌器具加以區別。 文件 文件應當充分表明試驗是在實驗室里按可控的檢查法進行的，一般包括以下方面：人員培訓與資格確認；設備驗收、檢定（或校準期間核查）和維修；設備的關鍵參數和使用記錄（如24 小時或7 天記錄圖）；培養基制備、貯藏、和質量控制；檢驗規程中的關鍵步驟；數據記錄與結果計算的確認 ；質量責任人對試驗報告的評估；數據偏離的調查。 實驗記錄 實驗結果可靠性的依賴于試驗嚴格按照標準操作規程進行，而標準操作規程應指出如何進行正確的試驗操作。實驗記錄應包含所有關鍵的實驗細節，以便確認數據的完整性。 實驗室原始記錄至少應包括以下內容：實驗日期、檢品名稱、實驗人員姓名、標準操作規程編號或方法、實驗結果 、偏差（存在時）、實驗參數（所使用的設備、菌種、培養基和批號以及培養溫度等）、主管/復核人簽名。 每一個關鍵的實驗設備均應記錄在案，所有按要求進行的校準過程及設備維護均需記錄。任何恰當的日常記錄都是有用的。設備溫度（水浴，培養箱，滅菌器）必須記錄和監測。 實驗記錄寫錯時，用單線劃掉并簽字。原來的數據不能抹去或被覆蓋。 所有實驗室記錄應以文件形式保存并防止意外遺失，正規的記錄應存放在特定的地方并有登記。 結果的判斷 由于微生物試驗的特殊性，在實驗結果分析時，應從各個可能的方面去考慮，不但要假設被污染，而且要考慮微生物在原料、輔料或試驗環境中存活的可能性。 此外，還應考慮微生物生長特性。 對實驗結果應進行充分和全面的評價。所有影響結果觀察的微生物條件和因素應完全考慮，包括與規定的限度或標準有很大的偏差結果。關鍵是應知道實驗結果與標準的差別是否有統計學意義。 若發現實驗結果不符合藥典各論要求或另外建立的質量標準，應進行原因調查。引起微生物污染結果不符合標準的原因主要有兩個：試驗操作錯誤或產生無效結果的試驗環境條件；產品的微生物污染總數超過規定的限度或檢出控制菌。 異常結果分析時，應充分考慮實驗室環境、抽樣區的防護條件、樣品在該檢驗條件下以往檢驗的情況，樣品本身具有使微生物存活或繁殖的特性等情況。此外，回顧試驗過程，也可評價該實驗結果的可靠性及實驗過程是否恰當。如果試驗操作被確認是引起實驗結果不符合的原因，那么應制定改錯方案以解決問題，按照正確的操作方案進行實驗，在這種情況下，對試驗過程及試驗操作應特別認真地進行監控。 如果依據分析調查結果發現試驗有錯誤而判實驗結果無效，那么這種情況必須記錄。實驗室也必須認可復試程序，如果需要，可按相關規定重新抽樣，但抽樣方法不能影響不符合規定結果的分析調查。 |
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